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改良盐析法提取人基因组DNA

材料准备:

1、1.5ml的eppendorf管(即EP管)

2、震荡仪

3、高速离心机

试剂准备:

1、TKM缓冲液

2、TRITON X100

3、10% SDS

4、5M的氯化钠溶液

5、蛋白酶K

6、无水乙醇

7、75%酒精

8、TE缓冲液

提取步骤:

(1)取500ul全血(EDTA抗凝),置于1.5ml eppendorf管中,加500μl TKM缓冲液后,再加约10μl TRITON X100,剧烈振荡混匀,放置2min,室温下离心2min(10000rpm)弃上清;

(2)加TKM缓冲液500μl,混匀后离心2min(10000rpm)弃上清;重复二次;

(3)加200μlTKM缓冲液混匀后再加15μl 10%SDS、3μl蛋白酶K,置55℃水浴30min;取出后加75μl5M Nacl,充分摇匀后快速离心10min(13000rpm);

(4) 将上清液移入新的eppendorf管中,加入1ml无水乙醇沉淀DNA;

(5)片刻离心,弃上清,将沉淀DNA用75%酒精快洗2-3遍;

(6)室温干燥后加TE缓冲液50μl溶解DNA;

(7)-20℃冰箱保存

(8) -20℃冷藏的DNA样品使用前置于室温待融后混匀;且反复冻融不超过5次。


现在从血液提取人类基因组的方法很多(如离心柱法),也有商品化的试剂盒出售,但盐析法成本低廉,相对安全等优点,仍是一个不错的方法。

欢迎交流。

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