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核酸电泳常用缓冲液配制方法(一)

一、50×TAE Buffer (pH8.5)

试 剂 名 称 用 量 终浓度
去离子水 至1000ml /
Tris 242g 2M
Na2EDTA•2H2O 37.2g 100mM
乙酸 57.1ml /

配制方法:先将Tris和Na2EDTA•2H2O在800ml超纯水中搅拌溶解,后加入乙酸并充分搅拌,用超纯水定容至1L即可。

二、10×TBE Buffer (pH8.3)

试 剂 名 称 用 量 终浓度
去离子水 至1000ml /
Tris 108g 890 mM Tris-硼酸
Na2EDTA•2H2O 7.44g 20mM
硼酸 55g /

配制方法:先将上述试剂在800ml超纯水中搅拌溶解,再用超纯水定容至1L即可。

三、10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer

试 剂 名 称 用 量 终浓度
DEPC处理水 至1000ml /
MOPS 41.8g 200mM
1 M NaOAc(DEPC处理) 20ml 20mM
0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC处理) 20ml 10mM

配制方法:

1.先将MOPS在700ml DEPC处理水中搅拌溶解,用2N NaOH调节PH至7.0;

2.再向溶液中加入NaOAc和EDTA,纯化水定容至1L;

3.用0.45μm滤膜过滤,室温避光保存。

注:溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用,但变黑时不要使用。

四、溴乙锭 (10 mg/ml)

试 剂 名 称 用 量
去离子水 至100ml
溴乙锭 1g

配制方法:

1.先将溴乙锭在100ml去离子水中搅拌至完全溶解(约数小时),后转移至棕色瓶中室温避光保存。

2.使用时的工作浓度是0.5g/ml

3.溴乙锭是一种致癌物质,须注意安全。

五、6 × Loading Buffer(DNA电泳用)

试 剂 名 称 用 量 终浓度
去离子水 至500ml /
EDTA 4.4g 30mM
Bromophenol Blue 250 mg0.05%(w/v)
Xylene Cyanol FF 250 mg0.05%(w/v)
甘油(Glycerol) 180 ml36%(v/v)

配制方法:

1.先将除甘油外的其他试剂在200ml去离子水中加热搅拌至充分溶解

2.再加入甘油180ml,用2N NaOH调节PH至7.0;

3.定容至500ml,室温保存。

六、10 × Loadlng Buffer (RNA电泳用)

试 剂 名 称 用 量终浓度
DEPC处理水 至10ml/
0.5 M EDTA(pH8.0) 200 ul10mM
Bromophenol Blue 25 mg0.25%(w/v)
Xylene Cyanol FF 25 mg0.25%(w/v)

配制方法:

1.先将上述试剂加入有约4ml DEPC处理水的离心管中,充分搅拌溶解;

2.再加入甘油5ml,充分混匀;

3.定容至10ml,室温保存。


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