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纯化水微生物限度检查

诊断试剂的生产都会涉及到纯化水的使用,对纯化水的监控也就是一件很普通的事情,纯化水检测包括最频繁的电导率、PH的每日监控和一定频率的化学检测等。这些在中国药典中都有详细说明,现只想说说纯化水微生物限度检查的那点小事。

方法原理:

薄膜过滤法

需要用品:

1、过滤系统:其中装载滤膜的部分需要高压灭菌(或装上滤膜后灭菌处理)。

微生物限度过滤系统
微生物限度过滤系统

2、滤膜:滤膜孔径应不大于0.45μm,直径一般为50mm。

微生物限度检查过滤膜

3、培养基:玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基。

步骤:

1、 装待检品水样的容器、取样的吸管、镊子等用品均要灭好菌,取水点打开让水流动一段时间。后快速取水样到容器中。

2、 把东西带入微生物限度实验室,以下步骤尽量在无菌条件下操作。

3、 先用缓冲液(PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液)对待检水样进行1:10 的稀释(10ml纯化水加90ml的缓冲液),后取10ml进行过滤,冲洗(用缓冲液50ml),冲洗量可按照验证方法的量,但不宜太多,主要是考虑避免滤膜上的微生物受损伤。

4、 视情况可做2~3个梯度的稀释浓度进行过滤,并每种培养基做双份测试,当时在深圳药检所学习时,做了三个梯度,每个梯度每种培养基做了两份,一个试样水就用掉了12张膜。

5、 纯化水微生物限度(微限)实验做三个梯度的理由,曾经有一个例子(药品):曾经遇到过的一种情况,用1:10供试液倒平皿,可能会一个菌都不长,而1:100及1:1000却长很多,这主要是因为样品药物有抑菌的作用,在1:10的条件下抑菌性还很高而是细菌被抑制生长,而1:100、1:1000时被稀释,抑菌性减小,有利于细菌的生长,这也是实验要首先做验证的原因,虽然纯化水出现这种可能性是微乎其微,这么做应该算是一种严谨的态度吧。

6、 过滤后,将集菌面朝上,贴于培养基上,靠培养基对膜的渗透供养菌生长,使其在膜上凸起生长,利于计数。反之则细菌向培养基渗入生长,会变模糊。

7、 营养琼脂培养基置于30-35摄氏度培养3天,玫瑰红钠在23-28摄氏度培养3-5天,每天记录细菌生长情况。

8、 到时间后计数菌落数量,换算成每ML多少个菌落报告。一般合格的标准是纯化水小于100cfu/ml,超纯水不得检出。

培养结果(示例):

微生物薄膜过滤法

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