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促进蛋白稳定的几个因素

1、小分子诸如甘油和蔗糖可以促进蛋白的稳定性,但是需要注意这些小分子对目的蛋白的活性是否有影响,例如蔗糖和PEG对转化酶有很好的稳定促溶作用,但是对溶菌酶却是一种变性剂。

2、盐离子可以明显提高蛋白的溶解性。在促进蛋白稳定上,常见的一些盐离子作用大小依次是(CH3)4 N > NH4 > K > Na > Mg > Ca > SO4 > Cl > NO3 > ClO4 > SCN。

3、高度稀释的蛋白样品通常是不稳定的,如果不能迅速浓缩,可以加入一些其他蛋白,比如BSA,来提高目的蛋白的稳定性。

4、不带电荷的氨基酸,如甘氨酸和丙氨酸,也可以作为蛋白的稳定剂使用,通常的工作浓度是20-500mM,常使用的还有GABA,TMAO。

5、一些底物、辅助因子或者竞争性抑制剂也可以提高目的蛋白的稳定性;因为它们可以促使蛋白采取一些更紧密的折叠形式,从而减少unfoled区域,避免聚集。

6、一些金属离子会使蛋白中的半胱氨酸氧化,导致聚集沉淀,因此,EDTA等一些螯合剂可以促进蛋白的稳定,而还原剂,比如巯基乙醇和DTT也可以防止蛋白被氧化(巯基乙醇的工作浓度一般为5-20mM,pH6.5和20摄氏度的条件下,巯基乙醇的半衰期是100小时,而pH8.5和20摄氏度的条件下,其半衰期降低到只有4个小时;DTT在低浓度,0.5-1mM的情况下是有效的还原剂,但是其浓度不应过高,因为浓度过高的DTT会变成蛋白的变性剂,而且在高盐条件下,DTT的溶解度下降,pH6.5和20摄氏度的条件下,DTT的半衰期是40小时,pH8.0和20摄氏度的条件下,下降到只有1.4小时)。

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