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贝克曼化学发光底物液催化反应时间线性

贝克曼的化学发光不管是ACCESS2还是DXI800,使用的都是碱性磷酸酶和AMPPD的体系,即使用碱性磷酸酶(AP)作为酶标记物,通过碱性磷酸酶催化AMPPD发光,发光强度跟碱性磷酸酶的存在量成正比,从而换算出待检物质的含量。

碱性磷酸酶催化AMPPD的反应效率是很慢的,使用增强剂是必须的选择,依照贝克曼的发光底物(基质液)呈黄绿色的形态,估计FITC钠盐应该少不了。

所幸碰到了贝克曼的底物液(本身较基质液),便做了一个很简单的实验,用碱性磷酸酶催化其基质液,并观察其随时间的变化曲线。

供测试了两个酶浓度,连续观察了80分钟,下边是曲线图:

图1 1:400倍碱性磷酸酶浓度下催化贝克曼基质液的RLU曲线图
1:400倍的碱性磷酸酶的浓度下催化贝克曼基质液的RLU曲线图

图2 1:400000倍碱性磷酸酶浓度下催化贝克曼基质液的RLU曲线图
1:400000倍的碱性磷酸酶的浓度下催化贝克曼基质液的RLU曲线图

将时间范围缩小,值观察10分钟内的情况:

图3 1:400倍碱性磷酸酶浓度下催化贝克曼基质液的前10min的直线拟合效果
1:400倍的碱性磷酸酶的浓度下催化贝克曼基质液的前10min的直线拟合效果

图4 1:400000倍碱性磷酸酶浓度下催化贝克曼基质液的前10min的直线拟合效果
1:400000倍的碱性磷酸酶的浓度下催化贝克曼基质液的前10min的直线拟合效果

不管高浓度还是低浓度,两者均呈很好的线性关系,所以加入底物后到检测的时间距离必须很精准,否则可能就会存在偏差,当然这点仪器肯定不在话下。

实际上,贝克曼的ACCESS2系统,大约是在加入底物液后7分钟这样开始测试RLU值的。

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