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紫外分光光度计测试BSA浓度曲线

紫外分光光度计测量蛋白浓度常可用经典公式:
蛋白的浓度(mg/ml)=1.45A280-0.74A260

亦可同时读取一系列倍比稀释的已知蛋白含量的标准液的光密度值,做出标准曲线,后换算出浓度。

测试时需注意的是:

1)用于仪器调零的液体与待测样品一致,标准蛋白也要使用同样的溶液;

2)光密度值应该在0.1-0.8之间;

3)要求蛋白质溶液完全透明;

4)对含量很低的蛋白质溶液可使用215/225nm的波长测定;

5)使用蛋白质浓度范围为0.1-1.0mg/ml。

现以牛血清白蛋白(BSA)作为测试项目验证一下结果

配制浓度约为10mg/ml的BSA溶液,然后按一定倍数稀释,至最低浓度为0.017mg/ml,用紫外分光光度计测试这一系列的BSA溶液的吸光度,做出标准曲线。

通过光谱的扫描发现,其峰值不一定在280nm上,而是在276nm或者277nm,可能是与蛋白的性质或者质量有关,其中276nm处的浓度-吸光度对应如下:

BSA浓度(mg/ml) 平均吸光度
10.920 3.893
2.184 1.449
0.437 0.337
0.087 0.198
0.017 0.116

图一:在坐标上作图的效果:

BSA浓度曲线图

图二:排除浓度最高的那一点(10.920mg/ml)后作图的效果:

BSA浓度线性图

综上看来,用紫外分光光度计测试牛血清白蛋白(BSA)的浓度,浓度太高曲线将逐渐平缓,而在0.02-2.0mg/ml浓度之间,基本能呈现出较好的线性。

这段范围应该可用作检测BSA的可靠的区间,和教科书式的说法差不多。


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